- 產品描述
腸出血性大腸桿菌O104:H4核酸檢測試劑盒
廣州健侖生物科技有限公司
產品規格:48T/盒;
保存條件:避光 -20度 保存。
我司提供各種流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠狀病毒、輪狀病毒、桿菌、鏈球菌、熱帶病毒等等核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法),還有各種原料和質控品,隨時歡迎您的來電: 楊
還提供其它進口或國產試劑盒:登革熱、瘧疾、流感、A鏈球菌、合胞病毒、腮病毒、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌、化妝品檢測、食品安全檢測等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產品。
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以下是我司提供的部分PCR產品
腸出血性大腸桿菌O104:H4核酸檢測試劑盒
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【公司名稱】 廣州健侖生物科技有限公司
【市場部】 楊永漢
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1.細胞嘅甲醛交聯與超聲破碎(*次)
1)拎出一平皿細胞(10cm平皿),加243 ul 37%甲醛,令到甲醛嘅終濃度為1%(培養基公司有9ml)。
2)37攝氏度哺育10min。
3)終止交聯:加甘氨酸至終濃度為0.125M。450 ul 2.5M甘氨酸于平皿中。撈勻后,喺室溫下放置5min即可。
4)吸盡培養基,用冰冷嘅PBS清洗細胞2次。
5)細胞刮刀有冇收集細胞于15ml離心理中(PBS依次為5ml,3ml同3ml)。預凍后2000rpm 5min有冇收集細胞。
6)又去上清。按照細胞量,加SDS Lysis Buffer。令到細胞終濃度為每200ul含2×106個細胞。噉每100ul溶液含1×106個細胞。再加蛋白酶抑制劑復合物。當MCF7生滿板為5×106個細胞。本次細胞生得約為80%。即為4×106個細胞。就每理加400ul SDS Lysis Buffer。將2理撈喺一齊,公司800ul。
7)超聲破碎:VCX750,25%功率,4.5S沖擊,9S卡罅。公司14次。
2.除雜同抗體哺育(*次)
1)超聲破碎結束之后,10000g 4度離心10min。抹得甩唔溶物質。
留羅300ul做實驗,其余保存于-80度。
300ul中,100ul加抗體做為實驗組;100ul唔加抗體做為對照組;100ul加4ul5MNaCl(NaCl終濃度為0.2M),65度處理3h解交聯,走電泳,檢測超聲破碎嘅效果。
2)喺100ul嘅超聲破碎產物中,加900ulChIPDilutionBuffer同20ul嘅五十×PIC。
再各加60ulProteinAAgarose/SalmonSpermDNA。4度扽轉撈勻1h。
3)1h后,喺4攝氏度靜置10min沉淀,700rpm離心1min。
4)取上清。各留羅20ul做為input。一理中加1ul抗體,另一理中就唔加抗體。4度扽轉過夜。
いち)を取り出していちシャーレ細胞(10 cmシャーレ)に加え、243 ul 37%でホルムアルデヒド、ホルムアルデヒドのzui終濃度は1%(培地共有9ml)。
に)37℃10min孵化する。
さん)終瞭架橋:加グリシンからzui終濃度を0.125M。450 ul 2.5Mグリシン于平シャーレで?;旌厢帷⑹覝丐欠胖盲工欷?min。
4)を盡くして培地、冷たいPBS 2回洗浄細胞。
ご)細胞を集め、15 mlスクレーパー細胞遠心チューブ中(PBS順次5、3mlと3ml)。予備冷卻後2000rpm 5min収集細胞。
ろく)「清。細胞にLysis量によって、Buffer SDS。でzui終濃度を含む細胞ごとに200ul×106の細胞。こんな100ul溶液を含むすべての細胞がいち×106。エプロン抑制剤の複合物を追加します。仮にMCF7がいっぱい生えて板をご×106の細胞。今回の細胞の長さは約80 %だった。つまり4×106個の細胞です。そのためそれぞれ管加入400ul SDS Lysis Buffer。に管を混ぜて、共800ul。
ななしち)超音波破砕:VCX750 25%、電力、4.5S衝撃、9S隙間。合計14回。
2 .雑用と抗體を除く(初日)
いち)超音波破砕終瞭後、じゅう、000gよんしよ度遠心10min。不溶性物質を除去する。
留學を300ul実験で、殘りの保存は-はちじゅう度。
300ulに加え、100ul抗體を実験組; 100ulプラス抗體を対照群;100ul加入4ul5MNaCl(NaCl終濃度を0.2M)、65度処理3h解架橋、走る電気泳動、超音波破砕効果測定。
に)100ulの超音波破砕の制品の中で、加入900ulChIPDilutionBufferと20ulのごじゅう×PIC。
また各加入60ulProteinAAgarose / SalmonSpermDNA。よんしよ度回転混合1h揺れる。
さん)1h後、よんしよ℃靜置10min瀋殿物、700rpm遠心1min。
よんしよ)とり清。各留を20ulをinput。一管の中に1ul抗體、一方の管の中には抗體を加えない。4度で夜を回る。