- 產(chǎn)品描述
腸侵襲性大腸桿菌核酸檢測試劑盒
廣州健侖生物科技有限公司
產(chǎn)品規(guī)格:48T/盒;
保存條件:避光 -20度 保存。
我司提供各種流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠狀病毒、輪狀病毒、桿菌、鏈球菌、熱帶病毒等等核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法),還有各種原料和質(zhì)控品,隨時(shí)歡迎您的來電: 楊
還提供其它進(jìn)口或國產(chǎn)試劑盒:登革熱、瘧疾、流感、A鏈球菌、合胞病毒、腮病毒、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團(tuán)菌、化妝品檢測、食品安全檢測等試劑盒以及日本生研細(xì)菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產(chǎn)品。
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腸侵襲性大腸桿菌核酸檢測試劑盒
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【公司名稱】 廣州健侖生物科技有限公司
【市場部】 楊永漢
【】
【騰訊 】 2042552662
【公司地址】 廣州清華科技園創(chuàng)新基地番禺石樓鎮(zhèn)創(chuàng)啟路63號二期2幢101-103室
1)用3%雙氧水浸泡真空轉(zhuǎn)移儀后,用DEPC水沖洗。
2)用RNAZap擦洗多孔滲水屏同膠屏,用DEPC水沖洗二次。
3)鏈接真空泵同真空轉(zhuǎn)移儀,剪取一蚊適當(dāng)大小嘅膜(膜嘅四邊緣應(yīng)大于膠屏孔口嘅5mm),膜喺Transfer buffer浸濕五分鐘之后,放置喺多孔滲水屏嘅適當(dāng)位。
4)起上膠屏,打上外框,扱上鎖。
5)將膠嘅多余地方切除,切后嘅膠四邊緣要可以打過膠屏窿,并zui低限打過邊緣約2mm,以防止漏氣。
6)將膠小心放置喺膜嘅上面,膜與膠之間唔可以有氣泡。
7)打開真空泵,令壓強(qiáng)維持得喺50~58mbar;即刻將transfer buffer加到膠面同周圍。每隔10min喺膠面加埋1ml transfer buffer,真空轉(zhuǎn)移2個(gè)鐘。
8)轉(zhuǎn)膜后,用鑷子擷住膜,于1x MOPS Gel Running buffer中細(xì)仔溝洗十秒,抹得甩殘余嘅膠同鹽。
9)用嗍水紙吸取膜上多余嘅液體之后,將膜置于UV交聯(lián)儀中自動(dòng)交聯(lián)。
10)將膠同紫之外,交聯(lián)后嘅膜,喺紫之外,燈下檢測轉(zhuǎn)移效率。(逃過咁長嘅紫之外,曝光時(shí)間)
12)將膜喺-20℃保存。
7.探針嘅制備
1)喺1.5ml離心理中配制以下反應(yīng)液:
模板DNA(25 ng)1ul
Random Primer 2ul
滅菌水11ul
總體積:14ul
2)95°C.加熱3分鐘之后,快手放置于冰冷卻5min。
3)喺離心理中按下列順序加以下溶液:
10×Buffer 2.5ul
dNTP Mixture 2.5ul
111 TBq/mmol[a-32P]dCTP 5 ul
Exo-free Klenow Fragment 1 ul
4)撈勻后(25ul),37°C.下反應(yīng)半個(gè)鐘。短暫離心,有冇收集溶液到理底。
5)65°C.加熱5min令酵素失工作。
8.探針嘅純化同過活性測定:
1)準(zhǔn)備凝膠:將1g凝膠加30ml嘅DEPC水中,浸泡過夜。用DEPC水洗滌膨脹嘅凝膠數(shù)次,以除去可溶解嘅葡聚糖。換用新配制嘅TE(PH7.6)。
2)攞1ml一次過針筒,抹得甩內(nèi)肉推捍,將針筒篤用硅化嘅玻璃纖維塞住,喺針筒中裝填Sephadex G-50凝膠。
いち)用3%に移転儀オキシドール真空後、水で洗い流しDEPC。
に)で洗うRNAZap多孔漏水モニターやプラスチック. DEPC水で洗い流して二度。
さん)接続真空ポンプと真空計(jì)剪取移転、ひとつの適當(dāng)な大きさの膜膜の四週辺はよりプラスチック-オリフィスの5 mm)、膜トランスファーbuffer濡れご分後、置く多孔漏水-適切な位置。
よんしよ)にふたをかぶせてプラスチック.アウトライン、バックル施錠。
ご)は接著剤の余分な部分切除、切った後の接著四エッジがプラスチックパネル穴をし、少なくとも約2 mmを端漏れ防止。
6)接著剤を膜の上に置いておくと、膜と接著剤の間には気泡ができない。
ななしち)を開けて真空ポンプを維持して、圧力ごじゅう~58mbar;はすぐtransfer bufferゴム面と週りに加えて。10minゴム面でごとに加え1ml transfer buffer、真空移転に時(shí)間。
はち)転?zāi)め帷ⅴ豫螗互氓趣遣钉蓼à肽い稀?x MOPSジェルRunning bufferの中でそっと浸し洗浄じゅう秒、殘りの接著剤と塩を取り除く。
9)水用紙で膜に余分な液體を吸収した後、UV交換器の中に膜を置く。
10)は、ゴムと紫外線を交交した膜で、紫外線の下で、移動(dòng)効率を検出する。紫外線露出時(shí)間を避ける
12)膜は- 20℃で保存されます。
7 .針の製備
いち)1.5ml遠(yuǎn)心チューブで調(diào)合する以下の反応液:
DNAテンプレート(25 ng)1ul
ランダムにPrimer 2ul
滅菌水11ul
総體積:14ul
に)95°C加熱さん分後、迅速に置いては5min冷たい。
3)離心管に以下の順序で以下の溶液を追加する。
じゅう×Buffer 2.5ul
dNTP Mixture 2.5ul
111 TBq / mmol [ a-32P」dCTPごul
Exo-free Klenow Fragmentいちul
よんしよ)混合後(25ul)、37℃で反応さんじゅう分。しばらく心を離すと、溶液を収集して底を置く。
ご)65°C加熱5min酵素を失活。
8 .探知の純化及び比活性測定:
いち)の準(zhǔn)備ゲル:1 gゲル加入30 mlの水に浸しDEPC、泊まる。DEPC水で洗浄膨張のゲル數(shù)回、溶解除去のグルカン。替えのチームE(PH7.6)新配合。
に取っ1ml使い捨て注射器、除去內(nèi)芯ツイ守る、注射器の底で珪化のガラス繊維を、注射に裝填Sephadex G-50ゲル。
1) 用3%雙氧水浸泡真空轉(zhuǎn)移儀后,用DEPC水沖洗。
2) 用RNAZap擦洗多孔滲水屏和塑膠屏,用DEPC水沖洗二次。
3) 連接真空泵和真空轉(zhuǎn)移儀,剪取一塊適當(dāng)大小的膜(膜的四邊緣應(yīng)大于塑膠屏孔口的5mm),膜在Transfer buffer浸濕5分鐘后,放置在多孔滲水屏的適當(dāng)位置。
4) 蓋上塑膠屏,蓋上外框,扣上鎖。
5) 將膠的多余部分切除,切后的膠四邊緣要能蓋過塑膠屏孔,并至少蓋過邊緣約2mm,以防止漏氣。
6) 將膠小心放置在膜的上面,膜與膠之間不能有氣泡。
7) 打開真空泵,使壓強(qiáng)維持在50~58mbar;立即將transfer buffer加到膠面和四周。每隔10min在膠面加上1ml transfer buffer,真空轉(zhuǎn)移2小時(shí)。
8) 轉(zhuǎn)膜后,用鑷子夾住膜,于1x MOPS Gel Running buffer中輕輕泡洗10秒,去除殘余的膠和鹽。
9) 用吸水紙吸取膜上多余的液體后,將膜置于UV交聯(lián)儀中自動(dòng)交聯(lián)。
10) 將膠和紫外交聯(lián)后的膜,在紫外燈下檢測轉(zhuǎn)移效率。(避免太長的紫外曝光時(shí)間)
12) 將膜在-20℃保存。
7. 探針的制備
1) 在1.5ml離心管中配制以下反應(yīng)液:
模板DNA(25 ng) 1ul
Random Primer 2ul
滅菌水 11ul
總體積: 14ul
2) 95°C加熱3分鐘后,迅速放置于冰冷卻5min。
3) 在離心管中按下列順序加入以下溶液:
10×Buffer 2.5ul
dNTP Mixture 2.5ul
111 TBq/mmol[a-32P]dCTP 5 ul
Exo-free Klenow Fragment 1 ul
4) 混勻后(25ul),37°C下反應(yīng)30分鐘。短暫離心,收集溶液到管底。
5) 65°C加熱5min使酶失活。
8. 探針的純化及比活性測定:
1) 準(zhǔn)備凝膠:將1g凝膠加入30ml的DEPC水中,浸泡過夜。用DEPC水洗滌膨脹的凝膠數(shù)次,以除去可溶解的葡聚糖。換用新配制的TE(PH7.6)。
2) 取1ml一次性注射器,去除內(nèi)芯推捍,將注射器底部用硅化的玻璃纖維塞住,在注射器中裝填 Sephadex G-50凝膠。