- 產品描述
STG-1 | 恙蟲IgG ELISA | Scrub Typhus IgG ELISA | ELISA | 用ELISA方法檢測人體血清中恙蟲病IgG。 | 96份/盒 |
STM-1 | 恙蟲IgM ELISA | Scrub Typhus IgM ELISA | ELISA | 用ELISA方法檢測人體血清中恙蟲病IgM。 | 96份/盒 |
1、應用范圍
恙蟲病IgG ELISA試劑盒可用來檢測人是否感染恙蟲病東方螺旋體(OT),它是檢測血漿或血清中抗恙蟲病東方螺旋體源性重組抗原的IgG抗體的一種ELISA檢測系統。此實驗可輔助診斷人是否感染了恙蟲病東方螺旋體,此試劑盒不能用于篩查血液或血液成分,僅供體外診斷用。
2、前言說明
恙蟲病是一種由恙蟲病東方體引起的傳染病,恙蟲病東方體一種約細菌大小的寄生蟲,隸屬于立克次氏體科。如果被幼蟲狀態的恙螨(嚙齒目的寄生蟲)咬了,就會傳染恙蟲病。被恙螨咬后的典型表現是皮膚潰瘍,之后會出現高燒、全身斑點皮疹和淋巴結腫大。人在接觸二級營養體后,一般都會出現恙蟲病。但是這種疾病也流行于沙漠、高山和熱帶地區。恙蟲病是一種世界性的疾病,但主要存在于東南亞和西太平洋。在東南亞的一些地區,大約20%的疾病都是由恙蟲病引起的,并且是地方性的。在zui初被咬后,疾病大概會持續10至20天。如果加以治療,則高燒會在36小時內退去,但如果不治療的話,則會出現并發癥乃至死亡。
3、實驗原理
恙蟲病IgG ELISA試劑盒是一種定量檢測人血清和血漿中抗OT IgG抗體的酶免試劑。包被板的微孔中包被了重組抗原混合物(如下)。在檢測的時候,血清應當用Inbios的樣品稀釋液稀釋后再加入微孔中,具體請見如下的“血清應用范例”。在溫育并洗板后,在微孔中加入HRP標記的IgG酶聯物。溫育并洗板,再向微孔中加入TMB底物液并溫育。后再加入酸性終止液,并在450nm檢測底物反應的程度。所檢測到的OD值與樣品中IgG抗體的濃度成正比。陰性質控和弱陽性質控以內在質控形式提供,其目的是為了監測試劑盒成分的完整性。如果樣品與抗原間發生了反應,則樣品應當被認為是陽性的。
4、試劑盒成分
恙蟲病IgG ELISA試劑盒提供了足夠做96人份所需要的試劑。試劑盒成分如下:
恙蟲病檢測特定材料:
1)恙蟲病檢測抗原包被的包被板:帶板蓋的板架,恙蟲病東方體(OT)源性重組抗原包被的96孔包被板。2-8℃下儲存,有效期內穩定。
2)樣品稀釋液:1瓶,15ml,用于樣品稀釋??赡軙霈F沉淀,使用前輕輕混合。2-8℃下儲存,有效期內穩定。
3)HRP標記的即用型酶聯物:1瓶,6ml,內含即用型的HRP標記的抗人IgG溶液。2-8℃下儲存,有效期內穩定。
4)TMB底物液:1瓶,9ml液態底物液,2-8℃下儲存,有效期內穩定。注意:底物液必須始終儲存于避光試劑瓶中。
5)終止液:1瓶,內含6ml即用型的終止液,2-8℃下儲存,有效期內穩定。
6)10倍濃縮的洗滌液,1瓶,120ml,2-8℃下儲存,有效期內穩定。
7)EnWash:1瓶,20ml EnWash溶液,在加酶聯物后的洗板步驟間使用。2-8℃下儲存,有效期內穩定。
8)陰性質控:1支,30ul熱滅活陰性血清,陰性質控可輔助監測試劑盒的完整性,儲存于-70℃的環境下。
9) 陽性質控:1支,30ul熱滅活陽性血清,陽性質控可輔助監測試劑盒的完整性,儲存于-70℃的環境下。
注意:實驗開始前,所有的試劑和質控都必須平衡至室溫,反復倒置使溶液混合均勻。
5、實驗所需器材但試劑盒不提供
1)可在450nm處讀數的酶標儀
2)生物學或高純度水
3)37℃無二氧化碳的濕度孵育箱
4)洗板機
5)1-10ul的單道移液器,50-200ul的單道和多道移液器。
6)計時器
6、樣品的采集與準備
1)此實驗必須用血清來做。全血和血漿樣本不能直接檢測。
2)為了避免溶血,應當從凝固的紅細胞中盡快分離出血清。
3)樣品采集后應當盡快檢測掉,不要讓血清在室溫下停留過長時間。
4)實驗要使用血清,采血時注意靜脈采血的常規注意事項。樣品可在2-8℃下存放7天,凍存于-20℃或更低溫度時可存放30天。為了延長血清的有效期,我們可以將其凍存于-70℃的環境下。避免反復凍融樣品。
5)不要使用溶血的或脂血樣品。
6)實驗開始前,將凍存的樣品融解至室溫,并旋渦或倒置混合樣品。
7)如果血清需運輸,必需密封于容器,貼上聯合管制的標簽作為傳染性物質運輸。
7、實驗步驟
使用前,將所有的試劑成分和樣品都平衡至室溫。實驗前反復倒置以便試劑和樣品混合均勻。
試劑準備:
1)即用型洗滌液的配置:用生物學或高純度水將10倍濃縮型的洗滌液稀釋成即用型的洗滌液。為了制備即用型的洗滌緩沖液,我們可以將120ml 10倍濃縮的洗滌液加入到1080ml蒸餾水或去離子水中,沖洗掉所有晶體,旋渦混合溶液以至所有晶體都溶解掉。制備好的洗滌液可在室溫下穩定儲存4個月。注意:如果洗滌液里有微生物生長,則應當棄取。
2)包被板的準備:將實驗所需數目的板條置于板架上。將剩余的板條立即裝入包裝待中,并儲存于2-8℃的環境下,有效期內穩定。
注意:長期儲存的血清樣品不能反復凍融,血清可以儲存于-70℃的環境下。
注意:長期儲存的血清樣品不能反復凍融,血清可以儲存于-70℃的環境下。
操作步驟:
將所有的試劑成分和樣品都平衡至室溫。實驗前反復倒置以便試劑和樣品混合均勻。陽性質控、陰性質控和未知血清都必須做雙份檢測。
1)確定好所需檢驗的血清樣品量。
2)按照如下的“血清應用范例”組織血清樣品(僅供參考,用戶也可以自己設置相應的位置),用戶可以雜試管或ELISA塑料板內稀釋樣品。
3)用樣品稀釋液將樣品稀釋50倍(您可以在8ul的血清中加入392ul樣品稀釋液),混合。注意:血清和質控品不能低于4ul。
4)用移液器將稀釋好的血清和質控各50ul加入到相應的微孔中。
5)用封板膠僅在開放的微孔表面封板,所有板條的底部是沒有覆蓋的。
注意:這樣是為了保證溫度的分布在每個孔的底部和血緣相等地散播。一旦頂部密封阻礙了蒸發,任何多余的封板膠必需被剪掉。
6)37℃下保濕溫育板條30分鐘,在溫育器的底部放置水浴箱可達濕潤的作用。注意:不要將微孔板疊放,必須單獨地分層平輔。這對于溫度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何氣體,不要讓板條接觸任何濕潤的物質,如濕紙巾等。
7)溫育后,用洗板機洗板6次,每次每孔300ul。
8)在每一微孔中加入50ul即用型的酶聯物。
9)用封板膠僅在開放的微孔表面封板,所有板條的底部是沒有覆蓋的。(同步驟5)
10) 37℃下保濕溫育板條30分鐘。(同步驟6)
11) 溫育后,用洗板機洗板6次,每次每孔300ul。
12) 用多道移液器在每一微孔中加入150ul Enwash溶液。
13) 室溫溫育5分鐘。
14) 溫育后,用洗板機洗板6次,每次每孔300ul。
15) 用多道移液器在每一微孔中加入75ul TMB底物液。
16) 室溫避光溫育10min。
17) 溫育后,用多道移液器在每一微孔中加入50ul終止液,室溫溫育1min。
18) 溫育后,450nm處測 OD值。
8、臨界值的計算和結果說明
臨界值的計算:將沒有受感染的正常人血清的平均OD值+3SD來確定臨界值。例如:臨界值=平均OD值+3SD。下面臨界值是用印度人的正常血清檢測得到的,臨界值:0.370
注意:上述臨界值并不是用很多人群檢測得到的,所以,我們建議用戶能建立自己地域內的臨界值。
結果說明:
1) OD值高于臨界值的樣品被認為是有活性(陽性)的樣品,低于臨界值的樣品被認為是無活性(陰性)的樣品。
2) 有活性的(陽性)樣品必須重復檢測來確定結果是否正確,靠近臨界值的數值被認為是可疑樣品,此類樣品也必須重復檢測(做三份或更多份)。
總結:
實驗必須滿足如下表格中的要求:以下標準不能*說明試劑可能已退化或操作出現了錯誤,并且實驗必須重做。
因素 | 可接受范圍 |
陰性質控的OD值(NC) | <0.500 |
陽性質控的OD值(PC) | >0.800 |
Discrimination Capacity(RP/N) | ≥8.00 |
本譯文僅供參考,詳情請以原文為準。
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